ⅠNaċidu uklejkuintroduzzjoni
L-aċidu nuklejku huwa maqsum f'aċidu deossiribonuklejku (DNA) u aċidu ribonuklejku (RNA), li fosthom l-RNA huwa maqsum f'RNA ribosomali (rRNA), messaġġier RNA (mRNA) u trasferiment RNA (tRNA) skont il-funzjonijiet differenti tiegħu.Id-DNA huwa kkonċentrat prinċipalment fin-nukleu, il-mitokondrija u l-kloroform, filwaqt li l-RNA huwa distribwit prinċipalment fiċ-ċitoplasma.Bħala l-bażi materjali tal-espressjoni tal-ġeni, l-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku għandha rwol estremament importanti fir-riċerka tal-bijoloġija molekulari u d-dijanjosi molekulari klinika.Il-konċentrazzjoni u l-purità tal-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku se jaffettwaw direttament il-PCR sussegwenti, is-sekwenzjar, il-kostruzzjoni tal-vettur, id-diġestjoni tal-enżimi u esperimenti oħra.
Ⅱ Estrazzjoni ta 'aċidu nuklejku u metodu ta' purifikazzjoni
① Metodu ta 'estrazzjoni ta' fenol/kloroform
L-estrazzjoni tal-fenol/kloroform hija metodu klassiku għall-estrazzjoni tad-DNA, li prinċipalment juża żewġ solventi organiċi differenti biex jittratta l-kampjuni, jxolji l-aċidu nuklejku bbażat fuq id-DNA fil-fażi tal-ilma, lipidi fil-fażi organika, u proteini bejn iż-żewġ fażijiet.Dan il-metodu għandu l-vantaġġi ta 'spiża baxxa, purità għolja u effett tajjeb.L-iżvantaġġi huma operazzjoni kkumplikata u żmien twil.
② Metodu Trizol
Il-metodu Trizol huwa metodu klassiku għall-estrazzjoni tal-RNA.Il-metodu Trizol huwa maqsum f'fażi milwiema u fażi organika wara ċ-ċentrifugazzjoni bil-kloroform, li fiha l-RNA jiġi maħlul fil-fażi milwiema, il-fażi milwiema tiġi trasferita għal tubu EP ġdid, il-preċipitazzjoni tinkiseb wara li żżid isopropanol, u mbagħad purifikazzjoni ta 'l-etanol.Dan il-metodu huwa adattat għall-estrazzjoni tal-RNA minn tessuti, ċelloli u batterji tal-annimali.
③ Metodu ta 'purifikazzjoni tal-kolonna ċentrifugali
Il-metodu ta 'purifikazzjoni tal-kolonna ċentrifuga jista' jassorbi d-DNA speċifikament permezz ta 'materjali speċjali ta' adsorbiment tal-matriċi tas-silikon, filwaqt li l-RNA u l-proteina jistgħu jgħaddu bla xkiel, u mbagħad uża melħ għoli PH baxx biex jgħaqqad aċidu nuklejku, eluzzjoni ta 'valur PH għoli ta' melħ baxx biex tissepara u tippurifika l-aċidu nuklejku.Il-vantaġġi huma konċentrazzjoni għolja ta 'purifikazzjoni, stabbiltà għolja, l-ebda ħtieġa għal solvent organiku, u prezz baxx.L-iżvantaġġ huwa li jeħtieġ li jiġi ċentrifugat pass pass, aktar passi ta 'operazzjoni.
④ Metodu ta 'żibeġ manjetiċi
Il-metodu taż-żibeġ manjetiċi huwa li jinqasam il-kampjun tat-tessut taċ-ċellula permezz tal-lisat, jirrilaxxa l-aċidu nuklejku fil-kampjun, u mbagħad il-molekuli tal-aċidu nuklejku huma speċifikament adsorbiti fuq il-wiċċ tax-xoffa manjetika, filwaqt li impuritajiet bħal proteini u zokkor jitħallew ġo il-likwidu.Permezz tal-passi tal-qsim tat-tessut taċ-ċelluli, l-irbit manjetiku ta 'żibeġ b'aċidu nuklejku, ħasil ta' aċidu nuklejku, elużjoni ta 'aċidu nuklejku, eċċ., finalment jinkiseb aċidu nuklejku pur.Il-vantaġġi huma tħaddim sempliċi u użu ta 'żmien qasir, mingħajr il-ħtieġa ta' ċentrifugazzjoni pass.Għandu rekwiżiti tekniċi baxxi u jista 'jirrealizza tħaddim awtomatiku u tal-massa.Il-kombinazzjoni speċifika ta 'żibġa manjetika u aċidu nuklejku tagħmel l-aċidu nuklejku estratt b'konċentrazzjoni għolja u purità.L-iżvantaġġ huwa li l-prezz attwali tas-suq huwa relattivament għoli.
⑤ Metodi oħra
Minbarra l-erba 'metodi ta' hawn fuq, hemm qsim tat-togħlija, metodu ta 'melħ ikkonċentrat, metodu ta' deterġent anjoniku, metodu ultrasoniku u metodu enżimatiku, eċċ.
Ⅲ Tip ta' estrazzjoni ta' aċidu nuklejku
Foregene għandu l-pjattaforma tal-PCR Diretta ewlenija fid-dinja, pjattaforma ta 'iżolament ta' RNA b'kolonna doppja (DNA biss + RNA biss).Il-prodotti ewlenin jinkludu kits ta 'iżolament tad-DNA/RNA, PCR u reaġenti diretti PCR reaġenti molekulari tal-laboratorju serje.
① Estrazzjoni totali ta 'RNA
Kampjuni totali ta 'estrazzjoni ta' RNA jinkludu demm, ċelluli, tessuti ta 'annimali, pjanti, viruses, eċċ Purità għolja u konċentrazzjoni għolja ta' RNA totali jistgħu jinkisbu permezz ta 'estrazzjoni ta' RNA totali, li tista 'tintuża f'RT-PCR, analiżi taċ-ċippa, traduzzjoni in vitro, klonazzjoni molekulari, Dot Blot u esperimenti oħra.
Foregene relatatiKitts tal-Iżolament tal-RNA
Kit ta' iżolament ta' l-RNA totali ta' l-Annimali--Estratt malajr u b'mod effiċjenti RNA totali ta 'purità għolja u ta' kwalità għolja minn diversi tessuti tal-annimali.
Kit ta' iżolament ta' RNA totali taċ-ċelluli--RNA totali purifikat ħafna u ta 'kwalità għolja jista' jinkiseb minn diversi ċelloli kkultivati fi 11-il minuta.
Kit tal-Iżolament tal-RNA Totali tal-Pjanti--Estratt malajr RNA totali ta 'kwalità għolja minn kampjuni tal-pjanti b'kontenut baxx ta' polysaccharide u polyphenol.
Kit tal-Iżolament tal-RNA Viral--Iżola u jippurifika malajr l-RNA virali minn kampjuni bħal plażma, serum, fluwidi tal-ġisem mingħajr ċelluli u supernatanti tal-kultura taċ-ċelluli.
② Estrazzjoni tad-DNA ġenomika
Kampjuni ta 'estrazzjoni tad-DNA ġenomika jinkludu ħamrija, ħmieġ, demm, ċelluli, tessuti ta' l-annimali, pjanti, viruses, eċċ. L-estrazzjoni tad-DNA ġenomika tista 'tintuża fid-diġestjoni ta' l-enżimi, kostruzzjoni tal-librerija tad-DNA, PCR, preparazzjoni ta 'antikorpi, analiżi ta' ibridizzazzjoni Western blot, ċippa tal-ġeni, għolja -throughput sekwenzar u esperimenti oħra.
Foregene relatatiKits ta' iżolament tad-DNA
Kit tal-Iżolament tad-DNA tat-Tessut tal-Annimali-- Estrazzjoni u purifikazzjoni rapida ta 'DNA ġenomika minn sorsi multipli, bħal tessuti ta' annimali, ċelloli, eċċ.
Kitt Midi tad-DNA tad-Demm (1-5ml)--Pinsifika malajr DNA ġenomika ta 'kwalità għolja minn demm antikoagulat (1-5ml).
Tampun Buccali/Kit ta' iżolament tad-DNA tal-Karta tal-FTA--Pinsifika malajr DNA ġenomika ta 'kwalità għolja minn kampjuni ta' swab buccal/FTA Card.
Kit tal-Iżolament tad-DNA tal-Pjanti--Ippurifika malajr u tikseb DNA ġenomika ta 'kwalità għolja minn kampjuni ta' pjanti (inklużi kampjuni ta 'polisakkaridi u pjanti ta' polifenoli)
③ Estrazzjoni tal-plażmidi
Plasmid huwa tip ta 'DNA molekula żgħira ċirkolari fiċ-ċelloli, li huwa trasportatur komuni għar-rikombinazzjoni tad-DNA.Il-metodu ta 'estrazzjoni tal-plażmidi huwa li tneħħi l-RNA, tissepara l-plażmid mid-DNA ġenomika tal-batterja, u tneħħi proteina u impuritajiet oħra biex tikseb plasmid relattivament pur.
Ġenerali Plasmid Mini Kit--Pinsifika malajr DNA tal-plasmid ta' kwalità għolja minn batterji trasformati għal esperimenti ta' bijoloġija molekulari ta' rutina bħal trasformazzjoni u diġestjoni tal-enżimi
④ Tipi oħra ta 'estrazzjoni, estrazzjoni ta' miRNA, eċċ.
Kit ta' iżolament tal-miRNA tal-annimali-- Estratt malajr u b'mod effiċjenti frammenti żgħar ta' RNA ta' 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA minn diversi tessuti u ċelloli ta' l-annimali
Ⅳ Ir-rekwiżiti għall-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku u r-riżultat tal-purifikazzjonis
① Biex tiġi żgurata l-integrità tal-istruttura primarja tal-aċidu nuklejku.
② Naqqas l-interferenza ta 'proteini, zokkor, lipidi u makromolekuli oħra
③ M'għandu jkun hemm l-ebda solvent organiku jew konċentrazzjoni għolja ta 'jonji tal-metall li jistgħu jinibixxu l-enzima f'kampjuni ta' aċidu nuklejku.
④ RNA u kontaminazzjoni oħra ta 'aċidu nuklejku għandhom jiġu eliminati meta jiġi estratt id-DNA, u viċi versa.
Ħin tal-post: Nov-24-2022
